重組人β干擾素在DHFR--CHO細胞中的高效表達

目的 由二氫葉酸還原酶缺陷型的中國倉鼠卵巢(DHFR--CHO)細胞高效表達重組人β干擾素(rhIFN-β),比較來源于E.coli、Yeast和CHO細胞的IFN-β抗增殖活性.方法 采用PCR技術(shù),從pLG104R載體中擴增目的 基因,經(jīng)XhoⅠ和SmaⅠ雙酶切后克隆到真核表達載體pCI-dhfr中,采用陽離子脂質(zhì)體介導方法,將構(gòu)建的表達載體轉(zhuǎn)染到CHO細胞中.通過MTX的加壓篩選,以病毒誘導的細胞病變抑制(CPEI)法進行活性定量檢測,獲得穩(wěn)定、高效表達rhIFN-β的CHO細胞株,并擴大培養(yǎng).分離純化后,定量并鑒定表達產(chǎn)物.采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法比較E.coli、Yeast和CHO細胞表達體系所生產(chǎn)的rhIFN-β的抗增殖活性.結(jié)果 得到由CHO細胞株表達的rhIFN-β純品,且抗增殖活性顯著高于其他2個表達體系.結(jié)論 CHO細胞可大規(guī)模生產(chǎn)rhIFN-β,且活性高于其他表達體系,顯示了以CHO細胞為生產(chǎn)平臺的優(yōu)越性.

作 者： 史艷秋 陳暢 顧黎 鄒思湘 宋靜 王鵬 SHI Yan-qiu CHEN Chang GU Li ZOU Si-xiang SONG Jing WANG Peng   作者單位： 史艷秋,SHI Yan-qiu(南京農(nóng)業(yè)大學,動物醫(yī)學院,江蘇,南京,210095;山東大學,微生物技術(shù)國家重點實驗室,山東,濟南,250100)

陳暢,顧黎,宋靜,王鵬,CHEN Chang,GU Li,SONG Jing,WANG Peng(山東大學,微生物技術(shù)國家重點實驗室,山東,濟南,250100)

鄒思湘,ZOU Si-xiang(南京農(nóng)業(yè)大學,動物醫(yī)學院,江蘇,南京,210095) 

刊 名： 中國生化藥物雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS  年，卷(期)： 2006 27(3)  分類號： Q786 R512.6+2  關(guān)鍵詞： 中國倉鼠卵巢細胞   β干擾素   真核表達   抗增殖活性  

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