臨床基因擴增檢驗技術(shù)教學(xué)的點滴體會

　　臨床基因擴增檢驗技術(shù)即我們常說的PCR技術(shù)，是分子生物學(xué)教學(xué)中的一項重要內(nèi)容，也是臨床應(yīng)用非常廣泛的一項技術(shù)。這項課程的學(xué)習(xí)和學(xué)生在臨床的實習(xí)往往是分開進行的。學(xué)生在校學(xué)習(xí)的主要是臨床基因擴增檢驗技術(shù)的核酸基本生物化學(xué)知識，PCR反應(yīng)的基本原理、質(zhì)量控制，臨床應(yīng)用等。當(dāng)學(xué)生進入臨床基因擴增實驗室實習(xí)工作后，他們會感覺到在學(xué)校學(xué)過的和實際看到的有很大區(qū)別，這是由于教學(xué)的側(cè)重點不同造成學(xué)生對臨床基因擴增檢驗技術(shù)的認(rèn)識不足，操作不夠嚴(yán)謹(jǐn)、規(guī)范。作為一名在臨床PCR實驗室工作的技術(shù)人員，我們的體會是臨床基因擴增檢驗技術(shù)的教學(xué)要緊密結(jié)合臨床，通過對臨床基因擴增實驗室各個環(huán)節(jié)地介紹實現(xiàn)對基本理論知識地講解，這樣更有利于學(xué)生融會貫通。

　　1、臨床基因擴增實驗室開展PCR技術(shù)必須具備的基本條件

　　教育學(xué)生對臨床基因擴增實驗室有一個總體的認(rèn)識，對學(xué)生實行規(guī)范、嚴(yán)格的入室教育,是順利完成教學(xué)實習(xí)任務(wù)的前提和保證[1]。使他們明確臨床基因擴增實驗室開展PCR技術(shù)必須具備的基本條件，即規(guī)范的PCR實驗室（經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心驗收合格）；編寫適合本實驗室的質(zhì)量手冊；具備經(jīng)PCR專業(yè)知識培訓(xùn)的技術(shù)人員；使用有生產(chǎn)批文的PCR試劑。通過對規(guī)范的PCR實驗室的介紹，使學(xué)生了解PCR實驗室是要經(jīng)過國家驗收的，實驗室的設(shè)計、安排都是有嚴(yán)格要求的。

　　2、通過講解PCR實驗室的操作流程，加深他們對實驗室的認(rèn)識。

　　PCR實驗室有嚴(yán)格的操作流程，進入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一流向進行，即準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)，我們在教學(xué)過程中一定要重點強調(diào)這一流程，在學(xué)生頭腦中強化這一概念。

　　3、通過講解PCR實驗室的操作規(guī)程，提高學(xué)生的生物安全意識。

　　PCR實驗室有嚴(yán)格的操作規(guī)程，我們某些實驗室人員由于怕麻煩，自己本身就不嚴(yán)格按照PCR實驗室的操作規(guī)程去做，比如進入實驗室不換大衣，不換拖鞋，不帶口罩、帽子，隨意亂扔污染性廢物等。在教學(xué)過程中，應(yīng)對看似小的細(xì)節(jié)進行強調(diào)，加強學(xué)生的認(rèn)識。作為帶教老師，我們一定要嚴(yán)格要求自己，給學(xué)生作出榜樣，同時要嚴(yán)格要求學(xué)生做到，使他們有一個嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣，提高他們的生物安全意識。

　　4、通過講解加入內(nèi)標(biāo)來避免假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，幫助學(xué)生理解假陰性結(jié)果產(chǎn)生的原因及解決辦法。

　　臨床標(biāo)本在核酸提取的過程中，核酸可能丟失，可能殘留PCR擴增抑制物，擴增儀孔間溫度存在差異，這些原因均可導(dǎo)致擴增出現(xiàn)假陰性結(jié)果。要使學(xué)生知道，在臨床標(biāo)本進行核酸提取時，加入競爭性或非競爭性內(nèi)標(biāo)，可有效地避免假陰性結(jié)果的出現(xiàn)[2]。

　　5、通過講解HBV DNA和HCV RNA實時熒光PCR檢測試劑盒，使學(xué)生了解國產(chǎn)與進口試劑相比存在的主要問題

　　國產(chǎn)HBV DNA和HCV RNA實時熒光PCR檢測試劑盒與進口試劑相比存在的主要問題主要表現(xiàn)在三個方面：①靈敏度低，檢測結(jié)果穩(wěn)定性差。②過度追求操作的簡便化，如對標(biāo)本未進行核酸純化，加樣量和擴增反應(yīng)體積過小，沒有內(nèi)標(biāo)。③不同批次間的試劑穩(wěn)定性差。

　　6、通過講解HBV DNA和HCV RNA檢測量值溯源，加強學(xué)生對臨床PCR實驗室的質(zhì)量控制的認(rèn)識。

　　乙肝病毒和丙肝病毒核酸檢測沒有參考方法，只能通過標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來溯源[3]。第一代HBV DNA和HCV RNA檢測用國際標(biāo)準(zhǔn)分別于20xx年和1997年建立，目前已分別進入第二代和第三代。我國也已經(jīng)研制了HBV DNA和HCV RNA檢測的一級和二級國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

　　以上是我們在臨床基因擴增檢驗技術(shù)帶教過程中的一些體會，希望教師在今后的教學(xué)過程中，能夠從臨床實際出發(fā)兼顧講授基本理論知識，使學(xué)生對臨床基因擴增檢驗技術(shù)有更全面的認(rèn)識，使他們在日后的臨床工作中游刃有余。

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